血涂片的制作与染色技术

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血涂片的制作与染色技术

2023-08-16 04:21| 来源: 网络整理| 查看: 265

制作血涂片并进行染色,是临床中血细胞形态学检验,白细胞分类计数等检验项目的前提。能否快速制备高质量的血涂片,将影响到后续工作的开展,血片制作不佳,甚至会影响血细胞的识别。

一、血涂片的推制 血涂片推制的基本步骤 载玻片用酒精棉擦净,取盖玻片备用 用吸管吸取少量抗凝全血,管口轻触载玻片右1/4,使载玻片蘸上半滴全血 右手持盖玻片(拇指、中指夹持盖玻片,食指轻压盖玻片表面,将盖玻片平滑的一边压在载玻片血滴前方,向后拉盖玻片至血滴,待血滴扩散成线(夹角30°左右),匀速向前推片至载玻片尽头 扇动推好的血片,使其迅速干燥,以防细胞皱缩变形,并尽快染色

1.载玻片用酒精棉擦净,取盖玻片备用

载玻片的握持方法(左手持片) 资源描述:血涂片的推制:载玻片的左手持法。左手拇指和中指持载玻片。 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

2.用吸管吸取少量抗凝全血,管口轻触载玻片右1/4,使载玻片蘸上半滴全血

血片制作2:滴加血样 资源描述:用塑料吸管吸取少量抗凝全血,管口轻触载玻片1/4处,使载玻片蘸上半滴全血。 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

3.右手持盖玻片(拇指、中指夹持盖玻片,食指轻压盖玻片表面,将盖玻片平滑的一边压在载玻片血滴前方,向后拉盖玻片至血滴,待血滴扩散成线(夹角30°左右),匀速向前推片至载玻片尽头

血片制作3:盖玻片持法 资源描述:右手拇指、中指夹持盖玻片两缘,食指轻压玻片表面,将选好的盖玻片平滑边压在载玻片上血滴的前方,两玻片夹角30°左右;后拉盖玻片至接触血滴,待血滴扩散成线。 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社 血片制作4:推片 资源描述:右手拇指、食指在夹持盖玻片的同时,也夹持了载玻片的两条边,并以之为轨道前推盖玻片,直至载玻片的尽头。注意:对高黏度血液,应尽量减小玻片间的夹角。 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

4.扇动推好的血片,使其迅速干燥,以防细胞皱缩变形,并尽快染色

血片制作5:推制好的未染色的干燥血片 资源描述:要取得好的血涂片,应注意:①推片时用力要均匀;②推片速度适中;③玻片间夹角应固定。 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社 注意事项 推片时,血滴越大、玻片间夹角越大、推片速度越快,则血膜越厚;反之,则血膜越薄。 对高黏度血液,应尽量减小玻片间夹角。 应尽量采取未加抗凝剂的新鲜血液,以保证细胞的着色效果。 二、血涂片的染色

染色方式有很多,一般根据目的不同选择不同的染色方式。你可能接触过以下这些染色方式:

在组织切片和病理切片中常用的HE染色 细菌学检验中使用的革兰氏染色和美蓝染色 为观察脂肪和脂肪组织的苏丹III染色 为观察网状纤维时用的银染 此外还有用于神经学研究的锇酸染色等

在宠物临床中,血涂片的染色要兼顾染色时间短、染色效果好,一般使用瑞氏染色,有时也用瑞氏-吉姆萨染色。

瑞氏染色的基本操作步骤 将血片平置于染色架上 滴加染液,计其滴数,以盖满血膜为度。数秒后,滴加等量中性蒸馏水或中性缓冲液,用洗耳球轻吹,使混匀。 静置4min左右(根据气温等条件灵活掌握) 用蒸馏水/常水从载玻片一端向另一端温和地冲洗(切勿先倾去染液再冲洗,或冲洗水流过急,否则沉淀物附于血膜而不易除去) 晾干,或用滤纸吸干后用油镜判读;有经验者可用高倍镜判读

染色时,染液、染色时间、环境温度等对染色效果都会产生影响。实际操作时,需要灵活掌握。

影响染色效果的因素分析 染液、水的酸碱度(应为中性) 新配制的染液偏碱性 放置时间越久,天青形成越多,染色越好;但日久甲醇挥发过多,染料衬垫,染色时可能出现沉渣 染色时间 教材:滴加染液后应静置1~2min,滴加蒸馏水/缓冲液后再静置4~10min 实践:染液滴加于血片上30s后,甲醇成分挥发较多,而滴加蒸馏水混匀再静置10min后,染液须超量滴加,否则可导致沉渣增多 高倍镜下推制和染色良好的血涂片 资源描述:高倍镜下推制和染色良好的血涂片(400×5):红细胞呈灰红色,单层排布,细胞间稍有间隙,基本不相重叠和挤压。 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社 推片不良的血涂片:细胞叠加 资源描述:推片不良的血涂片(瑞氏染色),1000×5:血细胞叠加、堆积 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社 染色不良的血涂片:染料沉积 资源描述:染色不良的血涂片(瑞氏染色),1000×5:染料沉渣过多 文件来源:范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社 ▼微信公众号『云端兽医』 长按二维码关注我们的公众号更多功能,可访问『云端兽医』网站www.cloudvet.org 推荐继续阅读 迪夫快速染色(DIFF-QUIK STAIN)宠物血液学检验——犬、猫、兔白细胞的识别图谱红细胞形态学检验:大红细胞红细胞形态学检验:椭圆形红细胞红细胞形态学检验:红细胞大小不均红细胞形态学检验:异形红细胞红细胞形态学检验:多染性红细胞红细胞形态学检验:靶形红细胞红细胞形态学检验: 口形红细胞红细胞形态学检验:红细胞皱缩红细胞形态学检验:有核红细胞红细胞形态学检验概述红细胞形态学检验:网织红细胞血涂片镜检:血液寄生虫红细胞形态学检验:影细胞红细胞形态学检验:钱串状红细胞红细胞形态学检验:小红细胞红细胞沉降速率白细胞分类计数红细胞计数(显微镜计数法)


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